細胞STR鑒定技術服務

研究背景

細胞系錯誤鑒定問題已有50年歷史，基于國際細胞庫的分析數(shù)據(jù)顯示：1984年細胞錯誤鑒定率為35%，1999年為18%，直到最近幾年，應用于生物醫(yī)學領域的細胞系需要鑒定的問題仍然很少有人關注。

近年來，大量研究表明 STR 基因分型 方法是進行細胞交叉污染和性質鑒定的最有效和準確的方法之一，STR基因分型應用于細胞鑒定已被ATCC等機構強烈推薦。美國的ATCC 細胞庫、德國的DSMZ細胞庫以及日本的JCRB細胞庫等為STR 分型提供了各細胞株的數(shù)據(jù)供比對。

技術簡介

STR ( Short Tandem Repeat, 短串聯(lián)重復序列)基因分型技術是細胞身份鑒定最準確有效的方法，被ATCC、ICLAC等權威機構認定為細胞鑒定的金標準。STR基因位點由長度為3~ 7個堿基對的短串連重復序列組成，廣泛存在于人類基因組中，被稱為細胞的DNA指紋。通過對這些STR位點的檢測，將檢查結果與專業(yè)的STR數(shù)據(jù)庫比對，從而確定被測細胞的真實身份，或判斷被測細胞是否與某些細胞，發(fā)生交叉污染。

人源細胞STR分型(cell line STR genotyping),是選用D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、PentaE、TH01、D12S391、D2S1338和FGA等19個具有高度多態(tài)性基因座和一個性別基因位點Amelogenin對人源細胞進行STR分型檢測。根據(jù)STR分型結果對細胞的生長狀態(tài)(是否存在交叉污染)和細胞的株系進行確認的技術手段。

人源細胞STR位點信息

D5S818 D13S317 D7S820 D16S539 VWA

TH01 AMEL TPOX CSF1PO D12S391

FGA D2S1338 D21S11 D18S51 D8S1179

D3S1358 D6S1043 PENTAE D19S433 PENTAD

為什么需要做細胞STR鑒定

細胞系錯誤鑒定所造成的后果

細胞系的損失

時間和金錢的損失

在公眾領域(文獻、專利等)提供錯誤信息

造成實驗結果不一致或不可重復

何時需做細胞STR鑒定

發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費前

使用細胞進行臨床治療(試驗)前

準備凍存保種或已凍存多年的細胞

一個涉及到細胞試驗項目開始/結束時

新得到的細胞或實驗室傳5代以上的細胞

細胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結果與預期差別較大

文章發(fā)表或常規(guī)定期鑒定

周期報價

周期：1 周

報價：800 元/樣

檢測流程

1.確定STR位點，設計實驗方案，包括熒光標記的選擇，引物的設計、合成和標記，熒光分子量內標的選用等。

2.按照所設計的實驗方案完成熒光PCR，利用瓊脂糖電泳檢測結果;若PCR產物特異性不夠，將進行優(yōu)化。

3.PCR產物通過ABI 3730XL測序儀器進行毛細管電泳檢測，獲得擴增片段大小的數(shù)據(jù)

4.用GeneScan 3.0/GenoTyper 2.0或GeneMapper 3.2等軟件對收集到的數(shù)據(jù)進行處理分析，將產物片段大小、數(shù)量多少的信息轉化成直觀準確的波形圖譜，為下一步進行關聯(lián)分析或連鎖分析等遺傳分析提供可靠的數(shù)據(jù)。

服務內容

細胞收集，基因組DNA提取

熒光弓|物PCR擴增21個str位點

產物經(jīng)測序儀電泳，獲得細胞基因分型結果

結果與ATCC、DSMZ、JCRB和RIKEN等細胞庫比對和分析

樣品要求

1. PCR產物或基因組DNA：濃度≥200ng/ul，總體積≥20ul，OD260/280在1.7至2.0之間;新鮮組織樣品：總量≥100mg的新鮮組織樣品或1～2ml血液樣品

2. PCR產物或基因組DNA請?zhí)峁悠返碾娪緳z測圖

3. 由于在實驗過程中，可能會出現(xiàn)某些STR位點難以檢測的情況，建議提供3～4個備選STR位點

4. 建議使用6FAM, VIC, NED以及PET四種熒光標記

5. 為盡量避免多種熒光信號的相互干擾，不建議同管檢測使用的熒光多于2種，多種熒光同管檢測，PCR產物大小需相差50bp以上

6. STR檢測中常會出現(xiàn)一些比正常產物短2～4個堿基的峰，這是由截斷PCR造成的，屬于正常現(xiàn)象，并不會影響實驗結果的分析。

您的細胞系認證服務 STR 概況報告包含

簡單易懂的STR等位基因表

支持每個位點的等位基因調用的電泳圖

結果的綜合解釋

STR 分型圖譜和細胞鑒定結果的書面報告 (中英文報告)

公司優(yōu)勢

通用熒光引物，大幅降低3730實驗成本

提供21個str位點選擇，極大提高鑒定的分辨率

數(shù)據(jù)分析基于3730測序平臺，結果穩(wěn)定可靠

可提供英文報告，用于文章發(fā)表

實驗周期短，價格優(yōu)惠，售后服務完善

項目案例

以PLC/PRF/5細胞為例，進行STR鑒定

人源細胞STR位點信息

STR分型圖譜

STR檢測結果

STR鑒定應用

STR分析已廣泛應用于遺傳制圖、連鎖性分析、親子鑒定、疾病基因定位和物種多態(tài)性研究等諸多領域。高度多態(tài)的微衛(wèi)星還可以用來在人群進行個體識別。刑事案件的偵破離不開法醫(yī)學的幫助,其中Y-STR檢測手段在鑒定中發(fā)揮的作用尤為突出。

Y-STR檢驗是法醫(yī)學對精子的一種DNA檢測手段，Y-STR基因座是位于男性Y染色體上的人類多態(tài)性STR位點，一般情況下，只有男性個體才有Y染色體，因此，Y-S T R具有男性遺傳，男性特異性的特點。Y-S T R即可作為性別鑒定的依據(jù)，同時在法醫(yī)學精斑及混合斑檢驗中發(fā)揮著重要作用。Y染色體為男性個體特有且呈現(xiàn)男性伴性遺傳,Y-STR檢測技術可以對嫌疑人或被害人的身份認定進行有效確認,故作為一種補充檢驗技術,此項技術在個體識別、親子鑒定、血緣關系鑒定及族譜DNA分析等方面具有十分重要的研究和應用價值。