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支原體污染檢測解決細胞培養(yǎng)過程中遇到難題

支原體污染檢測技術(shù)服務(wù)

技術(shù)簡介

支原體,直徑在0.1-0.3微米,是目前發(fā)現(xiàn)的最小的最簡單的原核生物,可以輕松地通過濾膜,混入培養(yǎng)系統(tǒng)中,呈高度多形性形態(tài)。支原體是實驗室中常見的污染細胞的原核生物,能夠抑制細胞代謝和生長,改變核酸合成,影響細胞抗原性,導(dǎo)致染色體改變等。因此每一株外來細胞都應(yīng)進行支原體檢測,并且應(yīng)對培養(yǎng)中的細胞進行定期支原體檢測。本實驗室采用PCR檢測法鑒定支原體污染現(xiàn)象,并用專門的試劑進行清除。

為什么要做支原體污染清除與檢測

當實驗室建立新的細胞系 ,細胞功能不正常,文章發(fā)表,國外期刊雜志要求,細胞凍存之前或?qū)嶒炇壹毎R?guī)定期檢測時,需要進行支原體污染檢測。從2013年開始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及細胞培養(yǎng)都要進行支原體檢測。以細胞為載體的科學(xué)研究,如果不能保證所用的細胞無支原體污染,則實驗結(jié)果很可能是極端不可靠甚至是完全錯誤的。

細胞支原體危害

支原體具有變形能力,可透過常見過濾膜(0.22-0.45 μm),因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除,常用的抗生素也對支原體無效。支原體污染是細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個世界性問題,世界各國細胞系支原體污染的平均比例為30-60%。支原體可通過細胞之間交叉污染,操作人員的口腔、皮膚造成污染,或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見,一般不會引起培養(yǎng)物混濁,因此細胞被支原體污染一般難以察覺。支原體會消耗必須氨基酸,影響細胞生長速率,促進代謝物積累,改變細胞形態(tài),影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成,抑制細胞因子表達,改變被污染細胞的基因表達譜,誘導(dǎo)染色體畸變。

操作流程

細胞支原體檢測清除流程

服務(wù)對象

實驗室的種子細胞,如從ATCC、JCRB、DMSZ等國外權(quán)威細胞庫采購的珍貴細胞系;

組織珍貴的原代細胞;

需要進行基因編輯的細胞;

各類干細胞(含iPS細胞);

稀有細胞

服務(wù)內(nèi)容

根據(jù)客戶提供的細胞名稱、細胞代次、細胞類型制定細胞的支原體清除方案

根據(jù)支原體特異性基因設(shè)計引|物,PCR法檢測支原體污染程度

提供完整的實驗報告 (中英文報告)、原始圖片和無支原體污染的細胞

周期:1-2 周

報價:1200元/株

樣本運輸要求

細胞懸液:用T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)活細胞一瓶,細胞融合度50-60%,充滿培養(yǎng)基,標明細胞名稱,常溫運輸。

凍存細胞:收集活細胞沉淀,加入1ml凍存液,用2ml無菌凍存管保存,標明細胞名稱,干冰運輸

細胞支原體污染檢測技術(shù)服務(wù)委托單

項目案例

細胞支原體清除項目案例

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